الفهرس 
IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 71 |  |  |
| | | from | 71 | | |
Abstract
تهدف هذه الدراسة إلى التحقيق في آثار نضوج البويضات المختلفة ووسط زراعة الأجنة على النضج في المختبر لبويضات الإبل واستخدام تقنيه حقن الحيامن المنوية داخل الهيولى (ICSI) مع الحيوانات المنوية البربخية المحفوظة بالتبريد. ومن المتصور أن تقدم النتائج معرفة ثاقبة لتعزيز إجراءات الإخصاب في المختبر للإبل.أجريت الدراسة في معمل وحدة الخصوبة والتكنولوجيا المساعدة على الإنجاب بمستشفى أمراض النساء والتوليد (جامعة القاهرة). رقم الموافقة الأخلاقية BUFVTM 08-11-22تم استخدام ما مجموعه 100 مبيض تم جمعها من 50 ناقة خلال موسم التكاثر (من ديسمبر 2019 إلى أبريل 2020) في هذه الدراسة. تم جمع المبايض من مجزر الوراق في الجيزة ومجرز البساتين في القاهرة في غضون ساعتين، تم نقل المبايض إلى المختبر في وعاء حراري مملوء بمحلول ملحي مسخن مسبقا ( 0.9٪ كلوريد الصوديوم) بالاضافه الي الجنتاميسين ويتم الحفاظ عليه عند 30-35 درجة مئوية. تم تجميع المبايض من الجسم وغسلها أربع مرات في المختبر: مرتين بالمحلول الملحي الدافئ ، مرة واحدة مع الكحول الإيثيلي (70 %) على الفور ، ومرتين أكثر بالمحلول الملحي الدافئة. تم استخراج البويضات من المبيضين باستخدام تقنيتين مختلفتين: الشفط والتقطيع. في تقنية الشفط (286 بويضة) ، تم سحب الحويصلات المبيضيه بحجم 2-8 مم باستخدام سرنجه مثبت عليها إبرة قطرها 18 وحدة وسعتها 5 مل تحتوي على محلول فوسفاتي متعادل (PBS) يحتوي على مصل عجل جنين (10٪) ومضاد حيوي (5 ميكرولتر/مل). في تقنية التقطيع (461 بويضة)، خضع المبيضان لتقطيع كامل باستخدام مشرط معقم في طبق دائري خاص 60 مم يحتوي على محلول فوسفاتي متعادل ومصل عجل جنين (10٪) . تم جمع سوائل التقطيع ونقلها إلى طبق بتري شفاف آخر.معدل تجميع البويضات = (عدد البويضات المجمعه / إجمالي عدد البصيلات) × 100تم تصنيف البويضات إلى أربع درجات: درجه 1 و 2 و 3 و 4. تم اختيار الدرجتين 1 و 2 واستخدامهما للنضج.تم استخدام 4 أنواع وسائط النضج التالية:1. GTL (وسيط مخزن للبيكربونات يحتوي على الهيالورونان وألبومين المصل البشري لزراعة الأجنة من الإخصاب إلى مرحلة الكيسة الأريمية وللنقل ، 10145 ، VitroLife ، السويد).2. HAM’S (يتكون من HAM’S F10 مع (10٪) FCS، جنتاميسين، مصل الافراس الحوامل (PMSG (0.01%, ، والهرمون المحفز لنمو حويصلات جراف (FSH ، 75 وحدة دولية)3. HAM’S 2 (يتكون من HAM’S F10 مع (10٪) FCS، جنتاميسين، PMSG ((0.01%, ، و FSH (150 وحدة دولية).4. HAM’S 3 (يتكون من HAM’S F10 مع FCS (10٪) ، جنتاميسين، PMSG ((0.01% و FSH (75 وحدة دولية)، وهرمون اللوتين (LH ، 75 وحدة دولية).تم غسل البويضات المختارة (عددها 600 بويضة) مرتين في محلول فوسفاتى متعادل ومرة واحدة في بيئة الانماء المحضنة مسبقا واستزرعت في وسائط النضج الأربعة المختلفة (150 بويضة / نوع من بيئة الزرع) . تم تحضين البويضات فى حضانه غاز ثاني اكسيد الكربون لمدة 30-40 ساعة عند 38.5 درجة مئوية ، 5٪ ثاني اكسيد الكربون والرطوبة القصوى. تم تقييم النضج من خلال تحديد توسع كتلة الخلايا الوساديه و الجسم القطبى.أظهرت النتائج أن:لوحظ ان هناك فرق معنوى (P < 0.01) في معدل تجميع البويضات بتقنيتين مختلفتين. بلغ عدد البويضات المجمعة 747 منها 461 (62٪) تم جمعها بواسطة تقنية التقطيع و 286 (38٪) بواسطة تقنية الشفط. تم العثور على تأثيربيئات النضج المختلفة على معدل النضوج المعملي لبويضات الإبل لتكون بمعدل عالى ، مع تسجيل أعلى مستوى من النضج مع HAM’S 1 (56%) وHAM’S 2 (68 %).تم جمع خصيتين لذكور الجمال العربية المذبوحة من مجزر الوراق في محافظة الجيزة. تم جمع العينات في وعاء حراري تحتوي على محلول ملحى متعادل دافئ ومضاد حيوي وتم نقلها إلى المختبر في غضون ساعتين. تم غسل الخصيتين مرتين باستخدام المحلول الملحي وتم جمع الحيوانات المنوية من البربخ بواسطة تقنية التدفق المائى باستخدام مشرط حاد معقم وسرنجة مثبت عليها ابرة قطرها 20 وحدة وسعتها 5 مل مملوءة بوسط التنظيف (HAM’S F10). تم دفع وسائط التنظيف برفق نحو الجزء السفلي من البربخ وتم تطبيق ضغط طفيف.تم تقييم جودة الحيوانات المنوية مباشرة وتراوحت الحركة بين 60-70٪. تم جمع وسائط التنظيف التي تحتوي على الحيوانات المنوية في طبق دائري خاص سعته 100 مم تم تدفئته مسبقا وتم نقله إلى أنبوب فالكون سعة 15 ملى وعمل طرد مركزي له عند 1500 دورة في الدقيقة لمدة 10 دقائق. تم التخلص من المادة الطافية وتم تخفيف حبيبات الحيوانات المنوية في 1 مل من وسائط الحيوانات المنوية (وسائط الحيوانات المنوية - TALP). خضع خليط حبيبات الحيوانات المنوية للحفظ بالتبريد بحجم متساو من وسائط التجميد (TYB مع الجلسرين والجنتاميسين ، FUJIFILM Irvine Scientific). تم تعبئة حبيبات السائل المنوى مع وسائط التجميد في قوارير سعة كل منها 0.5 مل ووضعها فوق بخار النيتروجين السائل لمدة 30 دقيقة ثم غمسها في النيتروجين السائل حتى الاستخدام تضمن الحقن المجهري إذابة قنينة الحيوانات المنوية المجمدة ، وخلطها مع وسائط 1 مل (وسائط خاصة بالحيوانات المنوية وتحضينها عند 39 درجة مئوية في حضانة 5٪ ثاني اكسيد الكربون لمدة 30-45 دقيقة تم تجمع 600 ميكرولتير من السطح ونقلها إلى أنبوب آخر. نضيف الحيوانات المنوية إلى طبق الحقن ونجرى تقنية الحقن المجهري.استخدم الحقن المجهري 40 بويضة من كل مجموعة من وسائط النضج لحقن الحيوانات المنوية داخل الهيولي. تم ضبط الجسم القطبي الأول في البويضة الناضجة في الساعة السادسة أو الثانية عشرة ، وماصة الحقن في الساعة الثالثة ، وحقن الحيوانات المنوية داخل الهيولى بعد كسر الغلاف المحيط بالبويضة. تم استزراع البويضات المحقونة في نوعين من وسائط زراعة الأجنة: الثقافة 1: HAM’S F10 بأضافة 10% من مصل العجل الجنين والبيئه الثانية : G-TL في حضانة بنسبة 5% ثاني اكسيد الكربون و 5% اوكسجين ودرجة حرارة 38.5 ثم فحص معدل الانقسام للأجنة عند اليوم 4 و 7 وتغيير وسط الانماء الجنيني عند اليوم 4.تم تصنيف الأجنة في اليوم 4 إلى ثلاث درجات بناء على عدد وتجانس الخلايا الجنينيه والنسبة المئوية لتجزئة الجنين: درجة 1 و 2 و 3. تم تحضين الأجنة ذات الدرجة 1 و 2 في اليوم 4 حتى اليوم 7 لتسجيل انتاج مرحلة البلاستوسست للأجنة.أظهرت النتائج أن:لم يتم العثور على فروق بين المجموعات المختلفة فيما يتعلق بتأثير وسائط النضج والاستزراع على عدد ونسبة أجنة الإبل المنتجة في المختبر في اليوم 4. ومع ذلك ، تم تسجيل فرق كبير (p< 0.05) بين الدرجات المختلفة للأجنة داخل كل مجموعة من الوسائط. لم يكن للأنواع المختلفة من نضوج البويضات ووسائط زراعة الأجنة أي تأثير على عدد ونسبة انتاج مرحلة البلاستوسست لأجنة الإبل بعد 7 أيام من التحضين.وجدت الدراسة الحالية أن معدل الانقسام كان أعلى (65-75٪) من الدراسات السابقة ، مما يشير إلى أنه قد تكون هناك عوامل تساهم في ارتفاع المعدل. تبين أن تركيز استراديول أكبر في مصل العجل الجنيني ، والذي قد يكون سبب لتعزيز معدل الانقسام. تشير النتائج إلى أن تركيز استراديول يؤثر بشكل كبير على معدل الانقسام. هذا يسلط الضوء على أهمية أخذ مستويات الهرمون في الاعتبار مع تعزيز الإجراءات الإنجابية المساعدة. الحيوانات المنوية البربخية المذابة المجمدة للجمل العربي قادرة على تخصيب البويضات وتطوير الأجنة في المختبر. يشيرالعمل الحالي محاولة لإنشاء أجنة الإبل العربية بنجاح من الحيوانات المنوية البربخية المجمدة المذابة (معدل الانقسام 75٪ وتطور مراحل البلاستوسست للأجنة 53.3٪).