الفهرس 
ContentsOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 143 |  |  |
| | | from | 143 | | |
Abstract
بكتريا المكورات العنقودية الذهبية (Staphylococcus aureus) هى فلورا طبيعية عادة ما تعيش على جلد الإنسان أو في جوف الأنف في الجهاز التنفسي. وفى بعض الأحيان تسبب مجموعة من الأمراض مثل أمراض الجهاز الهضمي، والتهابات المسالك البولية، وأمراض الالتهاب الرئوي والتهاب السحايا والتهاب العظم والنقي، التهاب الشغاف، متلازمة الصدمة السامة، تجرثم الدم، وتعفن الدم. وهدفت هذة الدراسه إلى استخدام جين الألفا هيمولايسين المسئول عن أنتاج السم لتعريف سلالات بكتريا المكورات العنقودية الذهبية. وأيضا أختيار سلالة لديه أكثر إنتاجية لسم الألفا هيمولايسين، وتم عزل الجين الألفا هيمولايسين وأستنساخ هذا الجين داخل بكتريا القولون. بروتين الألفا هيمولايسن النقى يستخدم كعلاج للأنسجة السرطانية المحتلفة. وقد أجريت هذه الدراسة فى معمل الميكروبيولوجى فى مستشفى الأطفال الجامعى بالمنصورة. تم عزل 108 عزلة بكتيرية من عينات الدم والبول والصديد الوارده ومنها 30 عزلة من المكورات العنقودية الذهبية. وقد تم توصيفهم وفقا للأسس البكتريولوجية الكلاسيكية من خلال دراسة النمط الظاهرى عن طريق صبغة الجرام للتعرف على شكل البكتريا تحت الميكروسكوب وكذلك إجراء التفاعل الكيماء الحيوية. تم زراعة 30 عزلة من بكتريا المكورات العنقودية الذهبية على وسط غذائى يحتوى على الدم للتعرف على سم ألفا هيمولايسين و كانت نسبته33.33٪. وقد تم أختيار أحد عشر عزلة من بين 30 عزلة وذلك لتعريفهم على المستوى الجزيئيى وتبين أن هذه العزلات تنتمى إلى نمطين مختلفين بناء على تحليل حزم البروتين الخلوى: النمط الأول يشتمل على العزلات 1‚2‚3‚5‚6‚11‚19‚21‚24‚25 بنسبة تطابق 100%, أما النمط البروتينى الثانى فيشتمل على العزلة 20 بنسبة تطابق 92%. ويستخدام تقنية التفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) للتأكد من وجود جين الألفا هيمولايسين فى الأحد عشر عزلة المختارة, وجدت نسبتة (90.91٪). واستخدام RT-PCR)) لقياس كمية التعبير الجينى لألفا هيمولايسين فى العزلات المختارة. من نتائجنا، ووجدنا انا السلاله رقم 5 أعلى إنتاجية للألفا هيمولايسين. تم عزل الجين الألفا هيمولايسين لعزلة رقم 5 واستنساخه والتعبير عنه. وأكدت نتائجنا أن عملية الأستنساخ قد تمت بنجاح لجين hia و تم تنقية البروتين ألفا هيمولايسين (34 كيلو دالتون) بواسطة SDS-PAGE. بروتين الألفا هيمولايسين النقى تم استخدامه بتركيزات مختلفة ولتحديد حيوية الخلايا لأربعة أنواع من الخلايا السرطانية (HepG-2، HCT-116، MCF-7، A-549) وتوصلت النتائج إلى ان. نسبة الخلايا الحية تمثل 31.69٪ في HepG-2، 36.27٪ HCT-116، 78.95٪ فيMCF-7، 67،28٪ في A-549. الألفا بروتين يكون مثبطة عالي النشاط ضد HepG-2 وHCT-116، وكان فاعليته ضعفه ضد MCF-7 وA-549. وأكدت النتائج التي توصلنا إليها أن سم الألفا هيمولايسين من الممكن أن يستخدم كعلاج للأنسجة السرطانية المختلفة. وخلصت هذه الدراسة ان أنتاج الألفا هيمولايسين من بعض الكائنات الدقيقه مثل S. aureus بروتين عن طريق الأستنساخ تكون عملية بسيطة جدا وغير مكلفة وذو كفاءة عالية وغير سامة وليس له تأثير جانبي واكدت الدراسه أن بروتين هيمولايسين يمكن أن يستخدم كمضادة للسرطان فى الخلايا البشريه.