الفهرس 
Chapter I : IntroductionOnly 14 pages are availabe for public view
 |  | from | 191 |  |  |
| | | from | 191 | | |
Abstract
هذه الدراسة تهدف الى استخدام بعض المحفزات المناعية لرفع كفاءة لقاح البروسيلا الحى Rev.1 الذى يستخدم فى تحصين المجترات الصغيرة ضد مرض البروسيلا مليتنزس ويعتبر إنتشارها فى الاغنام السبب الرئيسى لانتشار المرض فى الماشية فى مصر.
هذا إضافة الى أن رفع كفاءة هذا اللقاح يمكن حماية قطعان الاغنام من الاصابة بمرض بروسيلا اوفس المنتشرة فى كثير من الاغنام المستوردة.
فى بداية الدراسة تم فحص الصفات البكتيريولوجية المختلفة الخاصة بالعترات المستخدمة فى البحث وهى عترة Rev.1, والعترة الضارية B. ovis , والعترة الضارية بروسيلا مليتنزس 16M.
تم إنماء عترة Rev.1 فى وسط التريبتوز اجار والذى يحتوى على 10% سيرم عجول ومن ثم تم تجميع الخلايا وتجفيدها لتحضير لقاح Rev.1 عند العد البكتيرى 1-2 X109 للجرعة الواحدة وتم معايرتها.
هذه الدراسة اجريت على حيوانات خنزير غينيا وتم اختبار النقاوة والآمان والكفاءة والقوة المناعية للقاح Rev.1 المحضر محليا وكانت النتائج مطابقة للمواصفات العالمية.
تم تجربة اللقاح على مجموعات من حيوانات خنزير غينيا مع استخدام بعض المحفزات وهى كالتالى:
1- Crude OMPs الغلاف الخارجى لخلايا العترة الضارية بروسيلا مليتنزس 16M.
2- Flagellin المحضر محليا من العترة الضارية E. coli O157: H7.
3- الحفز الزيتى oily adjuvant.
4- vit E+ selenium.
عدد الحيوانات الكلى للدراسة: 150 حيوان مقسمة كالتالى:
7 مجاميع كل مجموعة 20 حيوان ماعدا المجموعة رقم (1) 30 حيوان:
• مجموعة رقم 1 (30 حيوان) من خنزير غينيا تم تحصينها بمحلول ملحPBS.
• مجموعة رقم 2 (20 حيوان) تم تحصينها بجرعتين crude OMPs وبينهما فترة زمنية 2 اسبوع.
• مجموعة رقم 3 (20 حيوان) تم تحصينها بلقاح Rev.1 المحضر محليا بجرعة (1-2 x 108) مستعمره حية/ 1سم حيوان وهى 10/1 من الجرعة المستخدمة فى الاغنام.
• مجموعة رقم 4 (20 حيوان) تم تحصينها ب
Rev.1 + 2 doses oily adjuvant crude OMPs
• مجموعة رقم 5 (20 حيوان) تم تحصينها ب
Rev.1 +2 doses of oily adjuvant crude OMPs + 2 doses flagellin
• مجموعة رقم 6 (20 حيوان) تم تحصينها ب
Rev.1 +2 doses of oily adjuvant OMPs+ 4doses (vit E+ selenium)
• مجموعة رقم 7 (20 حيوان) تم تحصينها ب
Rev.1 +2 doses of oily adjuvant OMPs+ 2 doses flagellin+ 4 doses (vit E+ selenium)
تم تجميع عينات الدم من القلب من جميع الحيوانات المحصنة اسبوعيا لمدة 8 اسابيع.
تم فصل السيرم وتجميعه عن درجة -70ºC ثم فحصه باستخدام اختبار روزبنجال واختبار التلازن الانبوبى المكون من الاول بتركيب البروسيلا أبورتس العترة S99، الثانى بتركيب البروسيلا مليتنزس العترة 16M وذالك لقياس الاستجابة المناعية الخلطية للحيوانات المحصنة.
وقد اثبتت النتائج ارتفاع الاستجابة المناعية الخلطية فى المجموعتين ارقام (7,5).
ولقد تم إجراء اختبار الصد المناعى (اختبار التحدى) فى المجاميع المختلفة من الحيوانات المحصنة وتم تقسيم كل مجموعة الى مجموعة محقونة بالعترة الضارية 16M تحتوى على (5 x 105) مستعمرة حية / 1سم ومجموعة ثانية تحصن بالعترة الضارية B. ovis تحتوى على (5 x 105) مستعمرة حية / 1سم ويتم الحقن بالتجويف البريتوني بالبطن.
تم تجميع عينات الدم المتجلط من القلب من كل مجموعة اسبوعياً لمدة 8 أسابيع ويتم الفحص باستخدام الروزبنجال واختبار التلازن الانبوبى وذلك لقياس الاستجابة المناعية الخلطية للحيوانات المحصنة.
كذلك تم وزن الحيوانات عند بداية الاسبوع التاسع بعد اجراء اختبار التحدى قبل الذبح.
بعد ذبح الحيوانات المحصنة وفصل الطحال لكل حيوان ووزنه ووضعه فى محلول ملحى PBS معقم, ومن ثم يتم طحنها لاجراء العد البكتيرى لميكروب بروسيلا مليتنزس 16M وكذالك B. ovis. وذلك لحساب نسبة الصد فى مجاميع الحيوانات المحصنة.
ولقد اثبتت النتائج أن أقل معدل لعيارية ميكروب البروسيلا وجد من نسبة الصد (log units of protection in spleen) فى المجموعتين ارقام (7,5).
وايضا تم دراسة اختبار المناعة الخلوية للقاح مع المحفزات المناعية المختلفة عن طريق اختبار البروسيلين (1NRA) وذلك بحقن حنازير غينيا فى سمك جلد الرقبة 0.1 سم وبعد مرور 48 ساعة يتم تحديد الحيوانات الاعلى استجابة ايجابيه وقد وجد ان الحيوانات المحصنة ارقام (7,5) اعلى نتائج الايجابية واعلى الاستجابة للمناعة الخلوية.
وقد اظهرت هذه الدراسة الحديثة ان اللقاح الحى المصنف من العترة بروسيلا مليتنزس Rev.1 يمكن استخدامه مع المحفزات المناعية المختلفة. وهى الطريقه المثلى لتوفير مستوى مناعى عالى فى الاغنام ضد مرض البروسيللوزس خاصة فى المناطق الموبوءة.